申請專利菌種未保存(菌種在保存中受到污染怎么辦？)
一、菌種在保存中受到污染怎么辦？
可以重新進行分離、純化和復壯。
1、先將菌種活化，如用適宜的液體培養基培養。培養條件是所保藏菌的適宜溫度等條件；
2、之后在平板上進行單菌落培養和分離；
3、挑取典型菌落，進行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察其顏色，紅色為革蘭氏陰性菌，紫蘭色為革蘭氏陽性菌；
4、顯微鏡下觀察細胞形態。
5、綜合3和4，選擇具有所保藏菌種典型特征的菌落再進行一次上述操作，至到沒有雜菌為止。
6、將純化的菌種再培養到對數期，制備甘油種或凍干菌長期保存。
二、常用的厭氧培養法及其原理？
一、基本原理
厭氧微生物在自然界分布廣泛，種類繁多，作用也日益引起重視。培養厭氧微生物的技術關鍵是要使該類微生物處于除去了氧或氧化還原勢低的環境中。
焦性沒食子酸與堿性溶液作用后，形成堿性沒食子酸鹽，在此反應過程中能吸收氧氣而造成厭氧環境；牛肉渣內既含有不飽和脂肪酸能吸收氧，又含有谷胱甘肽（glutathione）能形成負氧化還原電位差；厭氧罐是采用某種方法除去其中的氧，例如將鎂與氧化鋅制成產氫氣袋，放入罐中加水反應產生氫，鈀或鉑是催化劑，在常溫下催化氫與氧化合成水，則可除去密封的厭氧罐中的氧。
二、器材
巴氏芽孢梭菌（巴氏固氮梭狀芽孢桿菌，Clostridium pas- teurianum），熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）；
焦性沒食子酸，棉花，10%NaOH，滅菌的石蠟凡士林（1∶1），牛肉，蛋白陳，葡萄糖， NaCl，肉膏蛋白胨瓊脂培養基，小試管肉膏蛋白胨瓊脂斜面，厭氧罐，催化劑袋，氣體發生袋，指示劑袋，滅菌的帶橡皮塞或螺旋帽的大試管，滅菌的玻璃板（直徑比培養皿大3—4 cm），滅菌的滴管，燒瓶，刀等。
三、操作步驟
1、焦性沒食子酸法
（1）大管套小管法在大試管中放入少許棉花和焦性沒食子酸，焦性沒食子酸的用量按它在過量堿液中能每克吸收100ml空氣中的氧來估計，本實驗用量約0．5g。接種巴氏芽孢梭菌在小試管肉膏蛋白胨瓊脂斜面上，迅速滴入10％的NaOH于大試管中，使焦性沒食子酸潤濕，并立即放入除掉棉塞已接種菌的小試管斜面（小試管口朝上），塞上橡皮塞或擰上螺旋帽，置30℃培養。
（2）培養皿法取玻璃板一塊或用培養皿蓋，鋪上一薄層滅菌脫脂棉，將1g焦性沒食子酸放于其上。用肉膏蛋白陳瓊脂培養基倒平板，待凝固稍干燥后，在平板上一半劃線接種巴氏芽孢梭菌，下一半劃線接種熒光假單胞菌，并在皿底用記號筆作好標記。滴加10％NaOH溶液約2ml于焦性沒食子酸上，切勿使溶液溢出棉花，立即將已接種的平板覆蓋于玻璃板上或培養皿蓋上，必須將脫脂棉全部罩住，焦性沒食子酸反應物切勿與培養基表面接觸，以溶化的石蠟凡士林液（即vaspar）密封皿底與玻璃板或皿蓋的接觸處。置30℃溫箱培養。
2、皰肉培養基法
（1）取已除去筋膜、脂肪的牛肉500g，切成小方塊，置1000ml蒸餾水中，以小火煮1小時，用紗布過濾，擠干肉汁，將肉汁保留備用。再將肉渣用絞肉機絞碎，或用刀切碎，最好使其成細粒。
（2）將保留的肉汁加蒸餾水，使總體積為2000ml，加入20g蛋白陳，2g葡萄糖，5gNaCl和絞碎的肉渣。置燒瓶中搖均勻，加熱使蛋白胨溶化。
（3）取上層溶液調整pH為8．0，在燒瓶壁上用記號筆標明瓶內液體高度，1．05kg/cm2，121．3℃滅菌15分鐘后補足蒸發的水量，重新調整pH為8．0，再煮沸10—20分鐘，補足水量，再調整pH為7．4。
（4）把燒瓶內容物搖勻，將溶液和肉渣分裝于小試管中，肉渣約用，應用無菌手續加入已滅菌的石蠟凡士林，以隔絕氧氣。
（5）接種前可將上述已做好的庖肉培養基煮沸10分鐘，以除去溶入的氧，如果蓋有一層石蠟凡士林，需將石蠟凡士林先在火焰邊微加熱，使其溶化。在培養基手感不燙時按液體接種法接入巴氏芽孢梭菌，然后將接種的試管垂直，使石蠟凡士林凝固而密封培養基。再置30℃中培養。
3、厭氧罐培養法
（1）用肉膏蛋白胨瓊脂培養基倒平板，凝固干燥后，取兩個平板，每個平板一半邊劃線接種巴氏芽孢梭菌，另一半邊劃線接種熒光假單胞菌，并標記好。取其中的一個已接種的平皿置于厭氧罐的培養皿支架上，而后放入厭氧培養罐內；另一個已接種的平皿置培養室30℃培養。
（2）剪開催化劑袋，將催化劑倒入厭氧罐蓋下面的多孔催化劑盒內，擰緊催化劑盒的盒蓋。
（3）剪開氣體發生袋的切碎線處，并迅速將此氣體發生袋置罐內金屬架的夾上，再向袋中加入約10 ml水。同時，由另一人配合，剪開指示劑袋，將指示條暴露，立即放進罐內。
（4）迅速蓋好厭氧罐的蓋，將固定梁旋緊，置 30℃培養。
智立中特工作主要包括：廣泛分離、收集、保藏、交換和供應各類微生物質粒菌種；保存用于專利程序的各種可培養生物材料；質粒載體類保藏技術研究；微生物分離、培養技術研究；微生物鑒定和復核技術研究；保藏菌種的資料情報收集和提供及編輯微生物菌種目錄。
三、醫療廢物科室管理條例？
2003年6月16日中華人民共和國國務院令第380號公布 根據2011年1月8日《國務院關于廢止和修改部分行政法規的決定》修訂）
第一章 總 則
第一條 為了加強醫療廢物的安全管理，防止疾病傳播，保護環境，保障人體健康，根據《中華人民共和國傳染病防治法》和《中華人民共和國固體廢物污染環境防治法》，制定本條例。
第二條 本條例所稱醫療廢物，是指醫療衛生機構在醫療、預防、保健以及其他相關活動中產生的具有直接或者間接感染性、毒性以及其他危害性的廢物。
醫療廢物分類目錄，由國務院衛生行政主管部門和環境保護行政主管部門共同制定、公布。
第三條 本條例適用于醫療廢物的收集、運送、貯存、處置以及監督管理等活動。
醫療衛生機構收治的傳染病病人或者疑似傳染病病人產生的生活垃圾，按照醫療廢物進行管理和處置。
醫療衛生機構廢棄的麻醉、精神、放射性、毒性等藥品及其相關的廢物的管理，依照有關法律、行政法規和國家有關規定、標準執行。
第四條 國家推行醫療廢物集中無害化處置，鼓勵有關醫療廢物安全處置技術的研究與開發。
縣級以上地方人民政府負責組織建設醫療廢物集中處置設施。
國家對邊遠貧困地區建設醫療廢物集中處置設施給予適當的支持。
第五條 縣級以上各級人民政府衛生行政主管部門，對醫療廢物收集、運送、貯存、處置活動中的疾病防治工作實施統一監督管理；環境保護行政主管部門，對醫療廢物收集、運送、貯存、處置活動中的環境污染防治工作實施統一監督管理。
縣級以上各級人民政府其他有關部門在各自的職責范圍內負責與醫療廢物處置有關的監督管理工作。
第六條 任何單位和個人有權對醫療衛生機構、醫療廢物集中處置單位和監督管理部門及其工作人員的違法行為進行舉報、投訴、檢舉和控告。
第二章 醫療廢物管理的一般規定
第七條 醫療衛生機構和醫療廢物集中處置單位，應當建立、健全醫療廢物管理責任制，其法定代表人為第一責任人，切實履行職責，防止因醫療廢物導致傳染病傳播和環境污染事故。
第八條 醫療衛生機構和醫療廢物集中處置單位，應當制定與醫療廢物安全處置有關的規章制度和在發生意外事故時的應急方案；設置監控部門或者專（兼）職人員，負責檢查、督促、落實本單位醫療廢物的管理工作，防止違反本條例的行為發生。
第九條 醫療衛生機構和醫療廢物集中處置單位，應當對本單位從事醫療廢物收集、運送、貯存、處置等工作的人員和管理人員，進行相關法律和專業技術、安全防護以及緊急處理等知識的培訓。
第十條 醫療衛生機構和醫療廢物集中處置單位，應當采取有效的職業衛生防護措施，為從事醫療廢物收集、運送、貯存、處置等工作的人員和管理人員，配備必要的防護用品，定期進行健康檢查；必要時，對有關人員進行免疫接種，防止其受到健康損害。
第十一條 醫療衛生機構和醫療廢物集中處置單位，應當依照《中華人民共和國固體廢物污染環境防治法》的規定，執行危險廢物轉移聯單管理制度。
第十二條 醫療衛生機構和醫療廢物集中處置單位，應當對醫療廢物進行登記，登記內容應當包括醫療廢物的來源、種類、重量或者數量、交接時間、處置方法、最終去向以及經辦人簽名等項目。登記資料至少保存3年。
第十三條 醫療衛生機構和醫療廢物集中處置單位，應當采取有效措施，防止醫療廢物流失、泄漏、擴散。
發生醫療廢物流失、泄漏、擴散時，醫療衛生機構和醫療廢物集中處置單位應當采取減少危害的緊急處理措施，對致病人員提供醫療救護和現場救援；同時向所在地的縣級人民政府衛生行政主管部門、環境保護行政主管部門報告，并向可能受到危害的單位和居民通報。
第十四條 禁止任何單位和個人轉讓、買賣醫療廢物。
禁止在運送過程中丟棄醫療廢物；禁止在非貯存地點傾倒、堆放醫療廢物或者將醫療廢物混入其他廢物和生活垃圾。
第十五條 禁止郵寄醫療廢物。
禁止通過鐵路、航空運輸醫療廢物。
有陸路通道的，禁止通過水路運輸醫療廢物；沒有陸路通道必需經水路運輸醫療廢物的，應當經設區的市級以上人民政府環境保護行政主管部門批準，并采取嚴格的環境保護措施后，方可通過水路運輸。
禁止將醫療廢物與旅客在同一運輸工具上載運。
禁止在飲用水源保護區的水體上運輸醫療廢物。
第三章 醫療衛生機構對醫療廢物的管理
第十六條 醫療衛生機構應當及時收集本單位產生的醫療廢物，并按照類別分置于防滲漏、防銳器穿透的專用包裝物或者密閉的容器內。
醫療廢物專用包裝物、容器，應當有明顯的警示標識和警示說明。
醫療廢物專用包裝物、容器的標準和警示標識的規定，由國務院衛生行政主管部門和環境保護行政主管部門共同制定。
第十七條 醫療衛生機構應當建立醫療廢物的暫時貯存設施、設備，不得露天存放醫療廢物；醫療廢物暫時貯存的時間不得超過2天。
醫療廢物的暫時貯存設施、設備，應當遠離醫療區、食品加工區和人員活動區以及生活垃圾存放場所，并設置明顯的警示標識和防滲漏、防鼠、防蚊蠅、防蟑螂、防盜以及預防兒童接觸等安全措施。
醫療廢物的暫時貯存設施、設備應當定期消毒和清潔。
第十八條 醫療衛生機構應當使用防滲漏、防遺撒的專用運送工具，按照本單位確定的內部醫療廢物運送時間、路線，將醫療廢物收集、運送至暫時貯存地點。
運送工具使用后應當在醫療衛生機構內指定的地點及時消毒和清潔。
第十九條 醫療衛生機構應當根據就近集中處置的原則，及時將醫療廢物交由醫療廢物集中處置單位處置。
醫療廢物中病原體的培養基、標本和菌種、毒種保存液等高危險廢物，在交醫療廢物集中處置單位處置前應當就地消毒。
第二十條 醫療衛生機構產生的污水、傳染病病人或者疑似傳染病病人的排泄物，應當按照國家規定嚴格消毒；達到國家規定的排放標準后，方可排入污水處理系統。
第二十一條 不具備集中處置醫療廢物條件的農村，醫療衛生機構應當按照縣級人民政府衛生行政主管部門、環境保護行政主管部門的要求，自行就地處置其產生的醫療廢物。自行處置醫療廢物的，應當符合下列基本要求：
?。ㄒ唬┦褂煤蟮囊淮涡葬t療器具和容易致人損傷的醫療廢物，應當消毒并作毀形處理；
?。ǘ┠軌蚍贌?，應當及時焚燒；
?。ㄈ┎荒芊贌?，消毒后集中填埋。
第四章 醫療廢物的集中處置
第二十二條 從事醫療廢物集中處置活動的單位，應當向縣級以上人民政府環境保護行政主管部門申請領取經營許可證；未取得經營許可證的單位，不得從事有關醫療廢物集中處置的活動。
第二十三條 醫療廢物集中處置單位，應當符合下列條件：
?。ㄒ唬┚哂蟹檄h境保護和衛生要求的醫療廢物貯存、處置設施或者設備；
?。ǘ┚哂薪涍^培訓的技術人員以及相應的技術工人；
?。ㄈ┚哂胸撠熱t療廢物處置效果檢測、評價工作的機構和人員；
?。ㄋ模┚哂斜ＷC醫療廢物安全處置的規章制度。
第二十四條 醫療廢物集中處置單位的貯存、處置設施，應當遠離居（村）民居住區、水源保護區和交通干道，與工廠、企業等工作場所有適當的安全防護距離，并符合國務院環境保護行政主管部門的規定。
第二十五條 醫療廢物集中處置單位應當至少每2天到醫療衛生機構收集、運送一次醫療廢物，并負責醫療廢物的貯存、處置。
四、菌種放冰箱能保存多久？
菌種的保存方法
低溫存法
1.簡單保存法，將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1～2個月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達3～4個月；②液氮超低溫保存法，將生長穩定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點液體中，密封于安瓿管內，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長期保存。
脫水存法
1.沙土保存法，能產孢子的細菌、放線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內,裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養基上生長良好的孢子，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經真空抽干，外觀呈松散狀態,于4℃冰箱保存，保存期可達5～7年。
2.石蠟油封存法，在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。
3.冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑（一般用脫脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管內于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽結凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達5～10年之久。
五、微生物檢驗遇到沒有見過的菌種怎么辦？
微生物傳代最常用的就是斜面接種法，大致意思就是你從原代菌種里挑一點劃線法保存到小試管里的斜面培養基上，進而讓菌種不斷增殖保存下來。 其方法步驟如下： 首先，點燃酒精燈。將菌種和斜面培養基的兩只試管平行放在左手上，用拇指與其它四指夾住，并使中指位于兩試管之間，兩試管的管口齊平（圖9－5①）?！ ∑浯?，用右手先將棉塞擰轉松動，并稍拉出一些，以利又質卑緯觶ㄍ?9－5②）?！ 〉谌?，右手持接種針，在酒精燈將針頭部分燒紅滅菌（圖9-5③）。針頭以上凡是接種時可能進入試管的部分，均應用火灼燒?！ ∫韵虏僮鞫家乖嚬芸诳拷鹋??！ 〉谒?，用右手的小指與掌間拔掉左手上兩只試管上的棉塞，同時迅速將試管口在酒精燈上燒灼3秒鐘左右，使管口上可能沾染的少量雜菌得以燒死?！ 〉谖?，將燒過的接種針伸入菌種管內，先將針頭接觸培養基上沒有菌的部位（如斜面的頂端），使其冷卻，以免燙死被接種的菌體。然后輕輕接觸菌體，取出少許，慢慢將接種針抽出試管，接種針抽出時不要使針頭部分碰到管壁和管口，取出后，不可使針頭通過火焰，更不可觸及其它無關物品或桌面?！ 〉诹?，迅速將接種針伸進另一試管，在培養基上輕輕劃線，接種菌體于其上。劃線時，要由底部起劃較密的平行線，一直劃到頂部，以充分利用斜面面積，但不要將培養基劃破?！ 〉谄?，燒灼試管口，將棉塞塞上。塞棉塞時，不要移動試管迎接棉塞，以免試管在移動中納入可能含菌的空氣?！ 〉诎?，將針頭在火焰上燒灼滅菌。放回原處后，騰出手將棉塞塞緊。二、關于微生物酶活性測定，比較復雜，網上比較多，不同酶測定方法也不一樣，同學你自己慢慢查吧，O(∩_∩)O哈哈~
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